沙眼衣原体实验室检查

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沙眼衣原体检查适合衣原体所致的非淋球菌性尿道炎，是性传播疾病中得一种。

操作方法

男性将拭子插入尿道2~4cm,旋转3~5秒后取出。

女性先用无菌脱脂棉擦去阴道内黏液，再将取样拭子插入宫颈管内通过鳞柱状上皮交界处，直到几乎拭子头已看不到，旋转拭子15~20秒取出，不要碰到宫颈外及阴道壁。这样得到更多的柱状上皮细胞。

溃疡部位或腹股沟横痃抽吸液。

细胞培养法

原理

衣原体是专性细胞内寄生的微生物，它自身不能产生能量，依赖于宿主细胞提供。细胞培养为衣原体的生长提供了必要的条件。培养选用的细胞为衣原体感染的敏感细胞，使用化学物质或辐射处理细胞，并用离心方法使衣原体接种物易于进入细胞。在适宜的培养条件下，衣原体可在细胞中形成胞质内包涵体，特异性或非特异性染色后可在显微镜下观察。

McCoy细胞单层的制备

将McCoy细胞从液氮中取出，置37℃水浴中迅速融化。将其加入已含有细胞培养液的培养瓶中，待8h细胞贴壁后换新鲜培养液。继续培养2~3d，直至细胞融合成单层。吸去培养液，用少量胰蛋白酶液清洗细胞单层。加胰蛋白酶－EDTA液消化细胞单层，室温孵育2~3min，使细胞完全离散，加培养液吹打细胞使之混悬。计数细胞调整McCoy细胞浓度为1x105/ml，将细胞接种于96孔板中，每孔加入0.2ml细胞悬液。微量板孔中预先放入一直径为0.5cm细胞的圆形盖玻片，细胞即可在此玻片上生长，5%CO2、36℃培养48h，使盖玻片上长成细胞单层。

标本接种

将尿道或宫颈标本加标本液振荡混匀，将单层细胞取出，吸去培养液，加入标本液0.1ml。将已接种标本的微量板在35℃、3000g离心1h，弃去标本液，每孔加入0.2ml分离培养液，培养48h后观察结果。

碘染色

吸去微量板孔中的培养液加0.2ml甲醇于培养孔中，固定10min,弃去甲醇加0.2ml碘染色液，染15min后弃去染色液，加1滴封固液于洁净玻片上，将盖玻片从孔中取出，细胞面向下，放于封固液上，显微镜下观察。

吉姆萨染色

甲醇固定后，加0.2ml吉姆萨染色液染30min,吸去染液，用磷酸盐缓冲液洗片后，取出盖玻片，自然干燥后镜检。

结果判定

碘染色包涵体染成深棕色；吉姆萨染色包涵体染成深蓝色。

衣原体抗原检测（快速胶体金法）

 原理

衣原体脂多糖抗原与胶体金标记的单克隆抗体结合形成复合物，复合物经虹吸作用而移动，在结果窗被含有的单克隆抗衣原体抗体捕获而形成黑色沉淀线。质控窗含有抗衣原体抗体，无论是否形成抗原抗体复合物，均在质控窗形成衣原体抗体－抗该抗体复合物，形成黑色沉淀线。

标本处理&检测

将拭子置于采集管内，加入提取缓冲液，80℃水浴10min，放置室温冷却至少5min。滴加5滴标本提取物于试验板的检测窗，静置15min读取结果。

结果判定

质控窗出现一条黑线，表明试验上正常；如无，说明试剂失效。结果窗出现一条黑线，表明试验阳性；如无，试验阴性。结果窗出现一弱黑线，表明结果可疑。

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